一、外泌体背景介绍

外泌体（Exosomes）是细胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs）的一种，大小在30-150nm，由细胞内的多泡小体（Multivesicular bodies,MVB）与细胞膜融合后以外分泌的形式释放到细胞外，广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。

外泌体广泛参与细胞间物质运输与信息传递，调控细胞生理活动。同时，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进肿瘤发生和转移等作用；此外，外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。

二、中科普瑞外泌体分离和鉴定服务

1. 外泌体的分离

外泌体的样本来源主要有细胞培养上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等，其中细胞培养上清、血清/血浆、尿液是最常见的来源。如果是使用细胞培养上清，要注意细胞培养中一定不能添加 FBS。

外泌体分离方法有很多种，包括超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。但是这么多方法中，我们通常推荐选用超速离心法进行提取和分离，因为超速离心方法得到的外泌体不管是从得率还是纯度上都比较好。其他方法的特点如下：

²  过滤离心：得率比较低

²  密度梯度离心：步骤繁琐，得率较低

²  免疫磁珠：特异性比较高，得率较低

²  商用试剂盒：价格高，效果一般。分离出的外泌体电镜和粒径效果差。

超速离心法是目前价格适中、得率和纯度都能兼得的一种方法。

2. 外泌体的鉴定

外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。

²  透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。

²  纳米颗粒跟踪分析法：简称NTA，该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。

²  Western blot分子标志物检测：外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；参与生物功能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白X（ALIX）、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、热休克蛋白（HSP70、HSP90），以及细胞分泌的特异性蛋白。

三、中科普瑞外泌体高通量检测服务

外泌体内含有与细胞来源相关的蛋白质和核酸，可以运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞，参与细胞间通讯。不同细胞来源的外泌体所含有的蛋白成分和RNA不太相同，可作为多种疾病的早期诊断标记物，也能作为靶向药物的载体进行疾病治疗。中科普瑞利用平台优势，为广大客户提供『外泌体高通量检测服务综合解决方案』。

中科普瑞外泌体高通量检测服务内容

²  外泌体全转录组测序服务

²  外泌体lncRNA测序服务

²  外泌体circRNA测序服务

²  外泌体mRNA测序服务

²  外泌体miRNA测序服务

²  外泌体芯片检测服务（ceRNA芯片）