Pyrosequencing甲基化检测服务

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þ  Pyrosequencing甲基化检测服务

焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)作为一种新的序列分析技术,能够快速地检测甲基化的频率,对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测,为甲基化研究提供了新的途径。中科普瑞为您提供基于QIAGEN公司焦磷酸测序平台的服务。



焦磷酸测序技术原理

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       焦磷酸测序技术是由4种酶(DNA 聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶)催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。

       具体过程如下:

1.     仪器向待检测样品中每次只加入一个核苷酸碱基(dNTP) ;

2.       互补的碱基结合在模板上时,会释放出焦磷酸基团Pyrophosphate (PPi) ;

3.       PPi在ATP硫酸化酶(ATP Sulfurylase)作用下,合成ATP,ATP作为能量分子,驱动荧光素在荧光素酶(Luciferase)的催化下转化为氧化荧光素,并发出与ATP能量成正比的荧光信号 ;

4.       信号被CCD数码相机捕捉,形成峰形PyrogramTM;

5.       未与模板结合的碱基将被三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)降解 ;

6.       加入下一种dNTP



焦磷酸测序实验流程

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焦磷酸测序在DNA甲基化中的应用 

²  基因组整体水平的甲基化检测

²  特异位点的甲基化检测

²  寻找新的甲基化位点


焦磷酸测序结果展示

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